Plásmido Doble Nickase (h) IRAP: sc-403731-NIC

La aminopeptidasa leucil/cistinil (LNPEP), también conocida como aminopeptidasa sensible a la insulina (IRAP), es una metalopeptidasa M1 dependiente de zinc que se localiza en compartimentos endosómicos y participa en el tráfico de membranas regulado. En células sensibles a la insulina, IRAP co-transporta con las vesículas de almacenamiento de GLUT4 y se moviliza hacia la membrana plasmática tras la señalización PI3K–AKT, lo que vincula a LNPEP con la captación de glucosa y los procesos de reciclaje de vesículas. IRAP también contribuye a la presentación cruzada de antígenos mediante el recorte de péptidos en endosomas, moldeando los repertorios de péptidos del MHC de clase I e influyendo en la vigilancia inmunitaria. La actividad o el tráfico de LNPEP/IRAP desregulados se han asociado con alteraciones de la homeostasis metabólica y con contextos de señalización inflamatoria, lo que la hace relevante para estudios sobre la acción de la insulina, la proteólisis endosómica y vías relacionadas con la inmunidad.

IRAP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LNPEP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LNPEP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LNPEP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LNPEP alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.