IRAK-4 Double Nickase Plasmid (m): sc-435222-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IRAK-4 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IRAK-4 Double-Nickase-Plasmid (m) und IRAK-4 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Irak4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IRAK-4 Double Nickase Plasmid (m) | sc-435222-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRAK-4 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-435222-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Irak4 kodiert die Interleukin-1-Rezeptor-assoziierte Kinase 4 (IRAK-4), eine Serin/Threonin-Kinase, die in angeborenen Immunzellen der Maus als essenzieller proximaler Signal-Knotenpunkt stromabwärts von MyD88-abhängigen Toll-like-Rezeptor- und IL-1-Rezeptor-Komplexen fungiert. Nach Rezeptoraktivierung fördert IRAK-4 den Zusammenbau des Myddosoms sowie Phosphorylierungsereignisse, die die Signalweiterleitung zu TRAF6 vorantreiben und schließlich zur Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege sowie zur Induktion entzündlicher Genprogramme führen. Diese Achse reguliert die Zytokinproduktion, die Aktivierung von Leukozyten und antimikrobielle Antworten und wird im Zusammenhang mit fehlregulierter Entzündung und Phänotypen der Immunsignalgebung breit untersucht. IRAK-4 ist daher ein zentraler molekularer Ansatzpunkt, um die Signalübertragung von Pattern-Recognition-Rezeptoren und die entzündliche transkriptionelle Kontrolle in zellulären und in vivo-Modellen zu untersuchen.
IRAK-4 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Irak4-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Irak4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Irak4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Irak4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.