IPMK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427508

Übersicht

Das murine Gen **Ipmk** kodiert die Inositolpolyphosphat-Multikinase (IPMK), ein multifunktionelles Enzym, das Inositolphosphate phosphoryliert und zur Bildung höherer Inositolpolyphosphate beiträgt, die an der Signaltransduktion beteiligt sind. IPMK ist an der Schnittstelle des Phosphoinositid- und Inositolphosphatstoffwechsels angesiedelt und beeinflusst nukleare Signalwege, die Regulation der Transkription sowie zelluläre Energiehomöostase-Pfade wie PI3K/AKT- und mTOR-assoziierte Signalübertragung. Über diese Funktionen wirkt IPMK auf Prozesse wie Wachstumskontrolle, Stressantworten und metabolische Regulation und wurde in Zusammenhängen untersucht, in denen eine fehlregulierte Inositolphosphat-Signalgebung mit krebsassoziierten Signalnetzwerken und Phänotypen metabolischer Erkrankungen verknüpft ist. Aufgrund seiner breiten Vernetzung in Signalwegen ist **Ipmk** ein nützliches Ziel, um zu untersuchen, wie inositolderivierte Botenstoffe Genexpression und Zellschicksalsentscheidungen koordinieren.

Das IPMK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ipmk-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ipmk-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ipmk nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die IPMK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ipmk-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der IPMK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ipmk-Exone abzielen, die für die IPMK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ipmk-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom IPMK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom IPMK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ipmk-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das IPMK HDR-Plasmid (m) und IPMK HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ipmk-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ipmk-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.