Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin αM/CD11b: sc-400563-ACT

ITGAM codifica la integrina αM (CD11b), que heterodimeriza con ITGB2 (CD18) para formar el receptor Mac-1/CR3, expresado predominantemente en células mieloides. Este receptor de adhesión y reconocimiento de patrones regula el rodamiento leucocitario, la adhesión firme y la transmigración, y modula la fagocitosis, la degranulación y el estallido oxidativo mediante vías de señalización “outside-in” que involucran quinasas de la familia Src, Syk, PI3K-AKT y MAPK. La integrina αM/CD11b también reconoce dianas opsonizadas por complemento (iC3b) y contribuye al manejo de complejos inmunes y a programas de citocinas inflamatorias. Los cambios genéticos y de expresión en ITGAM se asocian con una activación innata desregulada y se han estudiado en contextos que incluyen la autoinmunidad, la inflamación crónica y la biología de las células mieloides asociadas a tumores.

Integrin αM/CD11b El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGAM sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin αM/CD11b El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGAM en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGAM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin αM/CD11b. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGAM y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin αM/CD11b en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin αM/CD11b en células tumorales con expresión de ITGAM silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.