Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin αIIb/ITGA2B/CD41: sc-400614-ACT

ITGA2B code l’intégrine αIIb (CD41), un récepteur d’adhérence enrichi dans les plaquettes et les mégacaryocytes, qui s’hétérodimérise avec l’intégrine β3 (αIIbβ3) pour médiatiser la liaison au fibrinogène et au facteur von Willebrand lors de l’agrégation plaquettaire. Après engagement du ligand, αIIbβ3 déclenche une signalisation « inside-out » et « outside-in » qui coordonne le remodelage du cytosquelette, la dynamique des adhésions focales et la sécrétion des granules via des voies impliquant taline/kindline, les kinases de la famille Src, FAK, PI3K–AKT et MAPK. L’expression d’ITGA2B et sa disponibilité à la surface cellulaire sont centrales pour la thrombopoïèse et la formation du clou hémostatique, reliant cet axe aux études de la fonction plaquettaire, des réponses aux lésions vasculaires et des interactions avec l’inflammation. Une dérégulation ou des défauts héréditaires d’ITGA2B sont associés à des troubles de l’adhérence et de l’agrégation plaquettaires et offrent un point d’entrée mécanistique pour étudier les phénotypes hémorragiques anormaux et la maturation des mégacaryocytes.

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA2B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA2B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA2B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin αIIb/ITGA2B/CD41. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA2B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA2B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.