Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400614-ACT

ITGA2B codifica per l’integrina αIIb (CD41), un recettore di adesione arricchito in piastrine e megacariociti che eterodimerizza con l’integrina β3 (αIIbβ3) per mediare il legame a fibrinogeno e al fattore di von Willebrand durante l’aggregazione piastrinica. In seguito al legame con il ligando, αIIbβ3 attiva segnali “inside-out” e “outside-in” che coordinano il rimodellamento del citoscheletro, la dinamica delle adesioni focali e la secrezione dei granuli tramite vie che coinvolgono talina/kindlina, chinasi della famiglia Src, FAK, PI3K–AKT e MAPK. L’espressione di ITGA2B e la sua disponibilità sulla superficie cellulare sono centrali per la trombopoiesi e la formazione del tappo emostatico, collegando questo asse a studi sulla funzione piastrinica, sulle risposte alle lesioni vascolari e sul crosstalk infiammatorio. La disregolazione o difetti ereditari di ITGA2B sono associati a disturbi dell’adesione e dell’aggregazione piastrinica e rappresentano un punto di accesso meccanicistico per indagare fenotipi di sanguinamento anomalo e la maturazione dei megacariociti.

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ITGA2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ITGA2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ITGA2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Integrin αIIb/ITGA2B/CD41. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ITGA2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 nelle cellule tumorali con espressione di ITGA2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.