Plásmido Doble Nickase (m) Integrin α6/ITGA6/CD49f: sc-421164-NIC

Itga6 codifica la integrina α6 (ITGA6/CD49f), una subunidad α que se heterodimeriza principalmente con β1 o β4 para formar receptores de unión a laminina que anclan las células a las membranas basales. ITGA6 participa en la organización de las adhesiones focales y los hemidesmosomas, acoplando la interacción con la matriz extracelular a la señalización intracelular a través de las vías FAK/Src, PI3K–AKT y MAPK, que regulan la adhesión, la supervivencia y la migración. En tejidos de ratón, la integrina α6 está enriquecida en compartimentos epiteliales y de células madre/progenitoras, donde influye en la polaridad y en las interacciones con el nicho durante el desarrollo y la homeostasis tisular. La expresión o señalización desregulada de ITGA6 se estudia con frecuencia en contextos de alteración de la adhesión célula–matriz, programas de invasión y remodelación inflamatoria, lo que la hace relevante para modelos mecanísticos de enfermedad.

Integrin α6/ITGA6/CD49f El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Itga6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Itga6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Itga6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Itga6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.