Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin α6/ITGA6/CD49f: sc-400380-ACT

ITGA6 codifica la integrina α6 (CD49f), una subunidad α que se asocia principalmente con β1 o β4 para formar receptores de unión a laminina que organizan la adhesión célula–matriz extracelular. A través de la señalización de adhesiones focales y de las vías de la quinasa ligada a integrinas (ILK), las integrinas que contienen α6 regulan la dinámica del citoesqueleto, la polaridad celular, la migración y la supervivencia, influyendo en los comportamientos de células epiteliales y de células madre/progenitoras. ITGA6 se utiliza ampliamente como marcador de los compartimentos epiteliales basales y de progenitores residentes en tejidos, y la alteración de la señalización de la integrina α6 se ha asociado con cambios en la invasión, el estado de diferenciación y las interacciones con el microambiente en múltiples contextos patológicos. Sus funciones en el ensamblaje de hemidesmosomas y en el anclaje a la membrana basal la convierten en un objetivo frecuente en estudios sobre arquitectura tisular, reparación de heridas y fenotipos relacionados con la metástasis.

Integrin α6/ITGA6/CD49f El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin α6/ITGA6/CD49f El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin α6/ITGA6/CD49f. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin α6/ITGA6/CD49f en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin α6/ITGA6/CD49f en células tumorales con expresión de ITGA6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.