INSIG-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401381-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das INSIG-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- INSIG-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und INSIG-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf INSIG1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: INSIG-1: sc-390504
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
INSIG-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401381-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
INSIG-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401381-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INSIG1 kodiert das insulininduzierte Gen 1 (INSIG-1), ein Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das als Sterolsensor und zentraler negativer Regulator der Lipidhomöostase fungiert. INSIG-1 bindet an SCAP sowie an Sterol-Regulatory-Element-Binding-Proteine (SREBPs), um den SCAP–SREBP-Komplex unter sterolreichen Bedingungen im ER zurückzuhalten und dadurch die Prozessierung von SREBP und die nachgeschaltete Transkription cholesterin- und fettsäurebiosynthetischer Gene zu begrenzen. Über diesen Kontrollpunkt integriert INSIG-1 die Feedback-Regulation innerhalb des Mevalonat- und Lipogenesewegs und ist mit der ER-assoziierten Degradation (ERAD) von Komponenten des Sterolstoffwechsels verknüpft. Eine Fehlregulation der an INSIG1 geknüpften Sterol-Sensorik wurde bei metabolischen Phänotypen wie Dyslipidämie, hepatischer Steatose und Insulinresistenz untersucht und ist auch in Kontexten relevant, in denen ein veränderter Lipidmetabolismus die Anpassung an zellulären Stress unterstützt.
INSIG-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des INSIG1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von INSIG1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die INSIG1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit INSIG1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.