Inhibin β-C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421132

Panoramica

Inhbc codifica la subunità beta-C dell’inibina nel topo, un membro della superfamiglia del TGF-β che può contribuire alla formazione dei ligandi activina e inibina, influenzando così la segnalazione dipendente da SMAD. Attraverso la modulazione dell’attività della via TGF-β/activina, l’inibina β-C è implicata nella regolazione dei programmi di differenziamento cellulare, dell’omeostasi tissutale e nel controllo della proliferazione in modo dipendente dal contesto. Un’alterazione dell’equilibrio della segnalazione activina/inibina è associata a risposte infiammatorie e fibrotiche disregolate ed è stata collegata a cambiamenti in processi riproduttivi ed endocrini in molteplici sistemi modello. Nella ricerca sul topo, Inhbc rappresenta un nodo sperimentalmente gestibile per analizzare la disponibilità dei ligandi e le risposte trascrizionali a valle all’interno delle reti della superfamiglia del TGF-β.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Inhibin β-C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Inhbc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Inhbc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Inhbc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Inhibin β-C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Inhbc per lo studio della segnalazione di Inhibin β-C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Inhbc critici per la funzione di Inhibin β-C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Inhbc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Inhibin β-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Inhibin β-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Inhbc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Inhibin β-C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Inhibin β-C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Inhbc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Inhbc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.