Plásmido Doble Nickase (h) Inhibin β-A: sc-402676-NIC

INHBA codifica la subunidad beta-A de la inhibina humana, que se homodimeriza para formar activina A o se heterodimeriza con una subunidad alfa para formar inhibina A, reguladores secretados clave de la señalización endocrina y paracrina. La activina A señaliza principalmente a través de receptores de tipo I/II con actividad quinasa de serina/treonina para activar SMAD2/3 y modular programas transcripcionales que controlan la proliferación y diferenciación celular, la remodelación de la matriz extracelular y las respuestas inflamatorias. Mediante el crosstalk con redes de la superfamilia TGF-β, INHBA influye en la función gonadal, la homeostasis de los tejidos reproductivos y procesos del desarrollo. La desregulación de la señalización de INHBA/activina se ha asociado con fibrosis, remodelación del microambiente tumoral y cambios en el comportamiento de células inmunitarias y estromales, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos.

Inhibin β-A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus INHBA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de INHBA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de INHBA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con INHBA alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.