Plásmido Doble Nickase (m) IMPACT: sc-421126-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)IMPACT consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IMPACT (m) y el plásmido de doble nickasa IMPACT (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Impact. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) IMPACT | sc-421126-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) IMPACT | sc-421126-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IMPACT (imprinted and ancient) codifica una proteína conservada implicada en el control de la traducción y la adaptación celular al estrés, con funciones descritas en la modulación de nodos de señalización que influyen en la síntesis proteica y el crecimiento. En sistemas murinos, IMPACT se ha vinculado con la regulación de vías asociadas a eIF2α y con respuestas homeostáticas que acoplan el estado nutricional al rendimiento traduccional. A través de estos procesos, Impact puede moldear programas neuronales y metabólicos en los que se requiere un control estricto de la proteostasis y de la señalización de estrés. La desregulación de la traducción y de las vías de respuesta al estrés es ampliamente relevante en modelos de neurodesarrollo, neurodegeneración y disfunción metabólica, lo que convierte a Impact en un locus útil para estudios mecanísticos.
IMPACT El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Impact en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Impact. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Impact. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Impact alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.