ILT-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407764

Übersicht

LILRB4 kodiert das immunoglobulinähnliche Transkript 3 (ILT-3), einen inhibitorischen Leukozytenrezeptor, der überwiegend auf myeloiden antigenpräsentierenden Zellen wie dendritischen Zellen sowie Monozyten/Makrophagen exprimiert wird. ILT-3 trägt zur Immunhomöostase bei, indem es inhibitorische Signale über die ITIM-abhängige Rekrutierung von Phosphatasen weiterleitet und dadurch aktivierende Signalwege dämpft, die mit Antigenpräsentation, Kostimulation und der Produktion inflammatorischer Zytokine verknüpft sind. Über diese Mechanismen hilft ILT-3, die T‑Zell-Polarisation sowie toleranzassoziierte Programme im Rahmen des myeloid‑lymphoiden Crosstalks zu prägen. Eine dysregulierte Expression von LILRB4/ILT-3 wurde in Zusammenhängen wie chronischer Entzündung, Immunflucht im Tumormikromilieu und myeloischen Neoplasien untersucht, wobei veränderte inhibitorische Signalgebung die Immunüberwachung und die Gewebeimmunität modulieren kann.

Das ILT-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des LILRB4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des LILRB4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von LILRB4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ILT-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von LILRB4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ILT-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf LILRB4-Exone abzielen, die für die ILT-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere LILRB4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ILT-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ILT-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des LILRB4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ILT-3 HDR-Plasmid (h) und ILT-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von LILRB4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten LILRB4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.