Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-3Rα: sc-437304-ACT

IL3RA code la chaîne alpha du récepteur de l’interleukine‑3 (IL‑3Rα/CD123), une sous-unité de récepteur de cytokine qui confère la spécificité de liaison au ligand et s’associe à la chaîne bêta commune pour initier la signalisation dépendante de l’IL‑3. L’engagement d’IL‑3Rα favorise l’activation en aval des voies JAK/STAT, PI3K/AKT et MAPK/ERK, soutenant la survie et la prolifération des cellules hématopoïétiques ainsi que la différenciation de la lignée myéloïde. L’expression d’IL3RA est enrichie dans les progéniteurs hématopoïétiques et certains sous‑ensembles immunitaires, ce qui en fait un marqueur utile pour étudier les programmes induits par les cytokines et la dynamique du trafic des récepteurs. Une signalisation IL3RA dérégulée et une abondance modifiée du récepteur ont été associées à une myélopoïèse aberrante et à des phénotypes immunitaires inflammatoires, ce qui motive des investigations mécanistiques dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie.

IL-3Rα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL3RA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-3Rα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL3RA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL3RA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-3Rα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL3RA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-3Rα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-3Rα dans les cellules tumorales présentant une expression de IL3RA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.