Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-10Rα: sc-402486-ACT

IL10RA code la sous-unité alpha du récepteur de l’interleukine-10 (IL-10Rα), un composant de liaison aux cytokines à haute affinité qui s’associe à IL10RB pour former le complexe récepteur fonctionnel de l’IL-10. Lors de la liaison de l’IL-10, le récepteur active la signalisation JAK1/TYK2 et, en aval, des programmes transcriptionnels dépendants de STAT3 qui limitent la production de cytokines inflammatoires, restreignent l’activation des cellules présentatrices d’antigène et favorisent une régulation immunitaire protectrice des tissus. La fonction d’IL-10Rα est donc centrale pour l’homéostasie des macrophages et des cellules dendritiques, la tolérance immunitaire associée à la barrière épithéliale et la résolution de l’inflammation. Une dérégulation de la signalisation liée à IL10RA est associée à une activation immunitaire aberrante et à une pathologie inflammatoire, ce qui en fait une cible pertinente pour les études d’immunologie des muqueuses, d’auto-immunité et d’interactions hôte–microbiote.

IL-10Rα Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL10RA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-10Rα Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL10RA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL10RA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-10Rα. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL10RA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-10Rα au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-10Rα dans les cellules tumorales présentant une expression de IL10RA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.