IGFBP3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400682-ACT

IGFBP3 kodiert das insulinähnliche Wachstumsfaktor-bindende Protein 3, einen sezernierten Regulator, der an IGF‑I und IGF‑II bindet und dadurch deren Bioverfügbarkeit sowie die Signalübertragung über die IGF-Achse moduliert. Indem es die Interaktion mit dem IGF-Rezeptor abpuffert, beeinflusst IGFBP3 die Aktivität der PI3K‑AKT- und MAPK-Signalwege und prägt so zelluläre Proliferation, Überleben, Differenzierung und metabolische Antworten. IGFBP3 ist zudem an IGF-unabhängigen Prozessen beteiligt, darunter die Modulation von Apoptose- und Stressantworten durch Interaktionen mit Partnern an der Zelloberfläche und im Zellkern. Veränderte IGFBP3-Expression wurde in der Krebs- und Stoffwechselkrankheitsforschung in unterschiedlichen Kontexten beschrieben, was IGFBP3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der Dynamik von Wachstumsfaktorsignalen und der Regulation durch das Mikromilieu macht.

IGFBP3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IGFBP3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IGFBP3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IGFBP3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IGFBP3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IGFBP3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IGFBP3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IGFBP3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IGFBP3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IGFBP3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.