Plasmide CRISPR d'Activation (h) IGFBP1: sc-400915-ACT

La protéine 1 de liaison aux facteurs de croissance de type insuline (IGFBP1) est un régulateur sécrété de la biodisponibilité des IGF, qui module la signalisation IGF1/IGF2 en se liant aux ligands et en influençant leur interaction avec les récepteurs des IGF. Elle contribue à l’homéostasie endocrinienne et métabolique, en intégrant des signaux liés à l’état nutritionnel, à la signalisation de l’insuline et aux programmes transcriptionnels hépatiques, afin de moduler l’activité en aval des voies PI3K–AKT et MAPK. IGFBP1 influence aussi, de manière dépendante des IGF, les décisions de croissance et de survie cellulaires, et peut interagir avec des composants de la matrice extracellulaire pour affecter le remodelage tissulaire. Une expression altérée d’IGFBP1 a été associée à une dérégulation métabolique et est fréquemment évaluée dans des études portant sur la physiologie hépatique, l’inflammation et des contextes de signalisation associés au cancer.

IGFBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IGFBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IGFBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IGFBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IGFBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IGFBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IGFBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IGFBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IGFBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de IGFBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.