Plásmido Doble Nickase (h) IGF2R/M6PR: sc-401697-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)IGF2R/M6PR consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IGF2R/M6PR (h) y el plásmido de doble nickasa IGF2R/M6PR (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a IGF2R. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IGF2R/M6PR Anticuerpo (2G11): sc-53146
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) IGF2R/M6PR | sc-401697-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) IGF2R/M6PR | sc-401697-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IGF2R (también conocido como IGF2R/M6PR) codifica el receptor de manosa-6-fosfato independiente de cationes, una proteína de tráfico multifuncional que se une a hidrolasas lisosomales marcadas con M6P y media su clasificación desde la red trans-Golgi y los endosomas hacia los lisosomas. También funciona como receptor “depurador” (scavenger) de IGF2 extracelular, modulando la disponibilidad del factor de crecimiento e influyendo en programas de señalización vinculados a la proliferación y la diferenciación celular. A través de su papel central en el transporte endosomal-lisosomal, IGF2R afecta la función del sistema autofagia-lisosoma, el recambio de receptores y la proteostasis. La desregulación de IGF2R se ha asociado con alteraciones de la homeostasis lisosomal y desequilibrios en la señalización de factores de crecimiento, relevantes para fenotipos del desarrollo y para la investigación en biología del cáncer.
IGF2R/M6PR El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IGF2R en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IGF2R. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IGF2R. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IGF2R alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.