Plásmido CRISPR de Activación (h) IGF-1 Receptor α/β/IGF1R: sc-400084-ACT

IGF1R codifica el receptor del factor de crecimiento similar a la insulina 1, una tirosina cinasa receptora α/β unida por puentes disulfuro que se une a ligandos IGF para regular el crecimiento, la supervivencia y la diferenciación celular. Tras su activación, IGF1R inicia las vías de señalización canónicas PI3K–AKT–mTOR y RAS–RAF–MEK–ERK, influyendo en la progresión del ciclo celular, la resistencia a la apoptosis y los programas metabólicos. La comunicación cruzada (crosstalk) de IGF1R con la señalización del receptor de insulina y la adhesión mediada por integrinas también modula la motilidad y las respuestas al estrés en muchos tejidos. La expresión o señalización desregulada de IGF1R se investiga con frecuencia en contextos de transformación oncogénica, fenotipos de resistencia a terapias y trastornos metabólicos o del desarrollo.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IGF1R sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IGF1R en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IGF1R, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IGF-1 Receptor α/β/IGF1R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IGF1R y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IGF-1 Receptor α/β/IGF1R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IGF-1 Receptor α/β/IGF1R en células tumorales con expresión de IGF1R silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.