IFN-α6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421043

Panoramica

Il gene murino Ifna6 codifica l’interferone-α6 (IFN-α6), un interferone di tipo I che avvia programmi antivirali e immunomodulatori in risposta a segnali associati a patogeni e a danno tissutale. IFN-α6 si lega a IFNAR per attivare la via di segnalazione JAK–STAT, inducendo geni stimolati dall’interferone che regolano la difesa immunitaria innata, la presentazione dell’antigene e le reti citochiniche. Questa via modella esiti cellulari come il controllo della proliferazione e l’apoptosi e interagisce con la segnalazione dei recettori di riconoscimento del patogeno, incluse le vie RIG-I/MDA5 e TLR. Una segnalazione dell’interferone di tipo I deregolata è implicata nella suscettibilità alle infezioni virali e in fenotipi cronici infiammatori e simil-autoimmuni, rendendo Ifna6 rilevante per studi meccanicistici della patologia guidata dagli interferoni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ifna6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ifna6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ifna6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IFN-α6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ifna6 per lo studio della segnalazione di IFN-α6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ifna6 critici per la funzione di IFN-α6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ifna6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IFN-α6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IFN-α6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ifna6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IFN-α6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IFN-α6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ifna6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ifna6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.