Plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α6 (m): sc-421043

Présentation

Le gène murin *Ifna6* code l’interféron‑α6 (IFN‑α6), un interféron de type I qui déclenche des programmes antiviraux et immunomodulateurs en réponse à des signaux associés aux agents pathogènes et aux dommages. L’IFN‑α6 se lie à IFNAR pour activer la signalisation JAK–STAT, induisant des gènes stimulés par les interférons qui régulent la défense immunitaire innée, la présentation de l’antigène et les réseaux de cytokines. Cette voie module des issues cellulaires telles que le contrôle de la prolifération et l’apoptose, et recoupe la signalisation des récepteurs de reconnaissance de motifs, notamment les voies RIG‑I/MDA5 et TLR. Une signalisation des interférons de type I dérégulée est impliquée dans la susceptibilité aux infections virales ainsi que dans des phénotypes inflammatoires chroniques et pseudo‑auto‑immuns, ce qui fait d’*Ifna6* une cible pertinente pour des études mécanistiques de la pathologie induite par les interférons.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-α6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ifna6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ifna6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ifna6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IFN-α6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ifna6 pour l'étude de la signalisation de IFN-α6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ifna6 essentiels à la fonction de IFN-α6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ifna6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IFN-α6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le IFN-α6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ifna6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IFN-α6 plasmide HDR (m) et le IFN-α6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ifna6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ifna6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.