Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFI-44: sc-405329-ACT

L’IFI44 humain (protéine 44 induite par l’interféron ; IFI-44) est un gène stimulé par l’interféron, induit en aval de la signalisation des interférons de type I et de type III, intégrant des signaux issus des voies des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR) telles que les récepteurs de type RIG-I et l’axe cGAS–STING. L’expression d’IFI-44 est couramment utilisée comme marqueur des programmes transcriptionnels antiviraux dépendants de JAK–STAT, et plus largement de l’activation de l’immunité innée. Des niveaux d’IFI44 dérégulés ont été rapportés dans divers contextes inflammatoires et auto-immuns, ainsi que dans des signatures transcriptionnelles associées aux infections, reliant ce gène à une biologie des interférons pertinente pour la maladie. En recherche, l’IFI44 sert de point d’entrée moléculaire pour étudier l’amplitude de la réponse à l’interféron, la connectivité des réseaux de l’immunité innée et la régulation de gènes sensibles au stress.

IFI-44 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFI44 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFI-44 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFI44 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFI44, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFI-44. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFI44 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFI-44 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFI-44 dans les cellules tumorales présentant une expression de IFI44 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.