IFI-204 Double Nickase Plasmid (m): sc-421033-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IFI-204 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IFI-204 Double-Nickase-Plasmid (m) und IFI-204 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Ifi204 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IFI-204 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421033-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IFI-204 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421033-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Ifi204 kodiert IFI‑204, ein murines, interferoninduzierbares Mitglied der p200‑Familie, das als nukleinsäureabhängiger Regulator der angeborenen Immunität fungiert. IFI‑204 ist an der Erkennung zytosolischer DNA beteiligt und moduliert Programme interferonstimulierter Gene, wobei es nachgeschaltete Signalwege über STING–TBK1–IRF3 und verwandte entzündliche transkriptionelle Netzwerke mitprägt. Über die Pathogenabwehr hinaus wird IFI‑204 mit der Kontrolle der Zellzyklusprogression, Differenzierung und seneszenzassoziierten Programmen in immunologischen und stromalen Kontexten in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte IFI‑204‑Aktivität ist daher relevant für Modelle von Autoinflammation, antiviraler Abwehr und tumorassoziierter Immun-Signalgebung, bei denen Interferonwege und DNA‑Sensorik Krankheitsphänotypen beeinflussen.
IFI-204 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Ifi204-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Ifi204 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Ifi204-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Ifi204-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.