Plásmido Doble Nickase (h) IDH3G: sc-404994-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)IDH3G consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IDH3G (h) y el plásmido de doble nickasa IDH3G (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a IDH3G. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IDH3G Anticuerpo (C-5): sc-365489
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) IDH3G | sc-404994-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) IDH3G | sc-404994-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
IDH3G codifica la subunidad gamma de la isocitrato deshidrogenasa 3 (IDH3) mitocondrial dependiente de NAD, una enzima clave del ciclo del ácido tricarboxílico (TCA) que cataliza la descarboxilación oxidativa del isocitrato a α-cetoglutarato mientras genera NADH para la fosforilación oxidativa. Al influir en el equilibrio redox mitocondrial y en el flujo de carbono a través del metabolismo central, IDH3G contribuye a la homeostasis energética, la anaplerosis y el suministro de precursores biosintéticos. La alteración de la función del complejo IDH3 se ha vinculado con desregulación metabólica y cambios en la respiración mitocondrial, procesos que con frecuencia se remodelan en estados celulares proliferativos y adaptados al estrés. Como nodo metabólico mitocondrial, IDH3G se estudia en el contexto de la bioenergética, el manejo de especies reactivas de oxígeno y la reprogramación metabólica relevante para diversos fenotipos asociados a enfermedades.
IDH3G El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IDH3G en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IDH3G. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IDH3G. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IDH3G alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.