Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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I2PP2A Double Nickase Plasmid (h): sc-400881-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das I2PP2A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- I2PP2A Double-Nickase-Plasmid (h) und I2PP2A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SET abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: I2PP2A: sc-133138
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
I2PP2A Double Nickase Plasmid (h) | sc-400881-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
I2PP2A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400881-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SET kodiert I2PP2A (auch bekannt als SET/TAF-Iβ), ein multifunktionales nukleäres Phosphoprotein, das die Proteinphosphatase 2A (PP2A) hemmt und phosphorylierungsabhängige Signalwege moduliert. I2PP2A ist über Wechselwirkungen mit Histonen und Faktoren der Nukleosomenassemblierung an der Chromatinorganisation und epigenetischen Kontrolle beteiligt und beeinflusst dadurch Transkriptionsprogramme, DNA-Replikation und DNA-Schadensantworten. Durch die Begrenzung der PP2A-Aktivität beeinflusst SET MAPK/ERK-, AKT- und Zellzyklus-Checkpoint-Signalwege und prägt so Proliferations- und Stresssignalantworten. Eine dysregulierte SET-Expression oder -Funktion wurde mit einer veränderten Phosphatase-Balance und Chromatinzuständen in verschiedenen Krebszusammenhängen sowie anderen Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit Proliferation oder Genominstabilität assoziiert sind.
I2PP2A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SET-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SET abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SET-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SET-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.