I-FABP Plasmide Double Nickase (h): sc-416794-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- I-FABP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il I-FABP Double Nickase Plasmid (h) e il I-FABP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FABP2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: I-FABP Antibody (E-9): sc-374482
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
I-FABP Plasmide Double Nickase (h) | sc-416794-NIC | 20 µg | $410.00 |
La fatty acid binding protein 2 (FABP2) codifica la proteina intestinale legante gli acidi grassi (I-FABP), uno chaperone lipidico citosolico altamente espresso negli enterociti dell’intestino tenue. I-FABP lega acidi grassi a catena lunga e altri ligandi idrofobici per facilitare il traffico intracellulare verso la β-ossidazione, la sintesi dei trigliceridi e il rimodellamento delle membrane, collegandosi così a vie che coordinano l’assorbimento dei nutrienti e l’omeostasi lipidica. Grazie al suo ruolo nella gestione dei lipidi alimentari e nel mantenimento dell’equilibrio metabolico dell’epitelio, FABP2 viene spesso studiato nel contesto della fisiologia della barriera intestinale, dello stress epiteliale legato all’infiammazione e della disregolazione lipidica associata alle malattie metaboliche. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di FABP2 sono state utilizzate come indicatore molecolare di danno agli enterociti e di permeabilità intestinale alterata in sistemi sperimentali.
I-FABP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FABP2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FABP2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FABP2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FABP2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.