I-309 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422834

Panoramica

Ccl1 codifica la chemochina CC I-309, un ligando secreto che segnala principalmente attraverso CCR8 per dirigere la chemiotassi e il posizionamento delle cellule immunitarie all’interno dei tessuti infiammati. Nel topo, CCL1 è prodotta da cellule T attivate, monociti/macrofagi e altri leucociti, contribuendo al traffico leucocitario, al coordinamento della rete di citochine e alla regolazione dei microambienti infiammatori. Questo asse si interseca con programmi infiammatori collegati a NF-κB e modella le risposte immunitarie adattative influenzando la polarizzazione e il reclutamento delle cellule T. Un’alterazione della segnalazione Ccl1/CCR8 è stata associata a modelli di infiammazione allergica, patologia di tipo autoimmune e infiltrazione immunitaria associata ai tumori, rendendola rilevante per studi meccanicistici di immunopatologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO I-309 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina I-309.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl1 per lo studio della segnalazione di I-309, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl1 critici per la funzione di I-309
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal I-309 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal I-309 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal I-309 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR I-309 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.