HYAL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404500-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HYAL1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HYAL1 Double Nickase Plasmid (h) e il HYAL1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HYAL1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HYAL1 Antibody (1D10): sc-101340
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HYAL1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404500-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HYAL1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404500-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HYAL1 codifica per l’ialuronoglucosaminidasi 1, un’endoglicosidasi lisosomiale che degrada l’acido ialuronico e altri glicosaminoglicani, regolando il turnover della matrice extracellulare e l’idratazione dei tessuti. Controllando il catabolismo dell’acido ialuronico, HYAL1 influenza l’organizzazione della matrice pericellulare, l’adesione e la migrazione cellulare, e gli output di segnalazione legati all’infiammazione e al rimodellamento dello stroma. Un’alterata attività di HYAL1 è stata associata a una degradazione della matrice deregolata e a fenotipi di rimodellamento osservati nella biologia del cancro, nei processi fibrotici e nelle patologie vascolari. HYAL1 è quindi ampiamente studiato nei pathway che collegano l’elaborazione lisosomiale dei glicani al comportamento cellulare dipendente dal microambiente.
HYAL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HYAL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HYAL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HYAL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HYAL1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.