HXK I CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401753

Übersicht

Das humane HK1-Gen kodiert die Hexokinase I (HXK I), ein mitochondrienassoziiertes Enzym, das die ATP-abhängige Phosphorylierung von Glukose zu Glukose-6-phosphat katalysiert und damit Glukose unwiderruflich der Glykolyse sowie verwandten biosynthetischen Stoffwechselwegen zuführt. Durch die Kontrolle des ersten geschwindigkeitsbestimmenden Schritts der Glukoseverwertung beeinflusst HXK I die zelluläre Energiebilanz, die Redoxhomöostase über die Kopplung an den Pentosephosphatweg sowie den Metabolitenfluss in die Glykogen- und Nukleotidsynthese. Die HK1-Aktivität ist über Interaktionen an der äußeren Mitochondrienmembran eng mit der Mitochondrienfunktion und apoptoseassoziierter Signalübertragung verknüpft. Eine veränderte HK1-Expression oder -Regulation wurde mit einer gestörten Glukosemetabolisierung bei Krebs sowie mit neuroentwicklungsbedingten und hämolytischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was die Relevanz von HK1 für die Forschung zur Stoffwechsel- und Mitochondrienbiologie unterstreicht.

Das HXK I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HK1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HK1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HK1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HXK I-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HK1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HXK I-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HK1-Exone abzielen, die für die HXK I-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HK1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HXK I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HXK I CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HK1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HXK I HDR-Plasmid (h) und HXK I HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HK1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HK1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.