HVCN1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-428718-ACT

O gene Hvcn1 de camundongo codifica a HVCN1, um canal de prótons dependente de voltagem que medeia a extrusão de prótons para regular o pH intracelular e o potencial de membrana. A HVCN1 é estreitamente acoplada à atividade da NADPH oxidase em fagócitos, dando suporte à compensação de carga durante o burst respiratório e modulando a sinalização por espécies reativas de oxigênio (ROS). Por meio dessas funções, influencia a ativação da imunidade inata, a eliminação microbiana e vias de sinalização dependentes de estado redox em células mieloides. A desregulação da atividade da HVCN1 tem sido associada a respostas inflamatórias alteradas e disfunção de células imunes, tornando o Hvcn1 um alvo útil para estudar imunometabolismo e a biologia do estresse oxidativo em modelos murinos.

HVCN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Hvcn1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HVCN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Hvcn1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Hvcn1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HVCN1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Hvcn1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HVCN1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HVCN1 em células tumorais com expressão de Hvcn1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.