Plásmido Doble Nickase (m) HtrA4: sc-436033-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)HtrA4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HtrA4 (m) y el plásmido de doble nickasa HtrA4 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Htra4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) HtrA4 | sc-436033-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) HtrA4 | sc-436033-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Htra4 del ratón codifica la serin proteasa secretada HtrA4 (familia HtrA), una enzima de control de calidad que escinde proteínas mal plegadas o dañadas y ayuda a regular la proteostasis extracelular y pericelular. Las proteasas HtrA se entrecruzan con programas de respuesta al estrés, incluida la señalización vinculada a la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), y pueden influir en vías asociadas a factores de crecimiento y a la matriz que determinan la supervivencia celular, la adhesión y la remodelación tisular. Se han descrito alteraciones en la expresión de HtrA4 en contextos de inflamación, biología vascular y fisiología reproductiva/placentaria, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios centrados en el estrés y el microambiente. En modelos murinos, la perturbación de HtrA4 puede ayudar a dilucidar la remodelación impulsada por proteasas y el crosstalk de señalización relevante para disfunciones tisulares asociadas a enfermedad.
HtrA4 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Htra4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Htra4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Htra4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Htra4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.