Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HtrA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402576-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HtrA2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HtrA2 Double Nickase Plasmid (h) e il HtrA2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HTRA2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HtrA2 Antibody (E-3): sc-365594
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HtrA2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402576-NIC | 20 µg | $410.00 |
HTRA2 codifica HtrA2 (nota anche come Omi), una proteasi serinica mitocondriale che contribuisce al controllo qualità delle proteine e all’omeostasi mitocondriale. In seguito a stress cellulare, HtrA2 può essere rilasciata nel citosol, dove modula l’apoptosi antagonizzando le proteine inibitorie dell’apoptosi (IAP) e influenzando l’attivazione delle caspasi. La proteina è inoltre collegata alla dinamica mitocondriale, alle risposte da stress da proteine non correttamente ripiegate e alle vie di proteostasi che orientano le decisioni di sopravvivenza cellulare. Un’attività o un’espressione deregolata di HTRA2 è stata associata a neurodegenerazione e ad altre condizioni caratterizzate da disfunzione mitocondriale e da una segnalazione apoptotica alterata.
HtrA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HTRA2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HTRA2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HTRA2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HTRA2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.