Plasmide CRISPR/Cas9 KO HspBP1 (h): sc-406487

Présentation

HSPBP1 code pour HspBP1, un facteur d’échange de nucléotides et co‑chaperon qui régule le cycle des chaperons HSP70/HSC70 en modulant l’échange ATP/ADP et la libération des protéines clientes. Par ses interactions avec les chaperons moléculaires, HspBP1 contribue à la protéostasie, à la signalisation des réponses au stress et au contrôle qualité des protéines mal repliées ou endommagées qui, autrement, pourraient s’accumuler et perturber l’homéostasie cellulaire. La dérégulation des réseaux de chaperons, y compris l’équilibre des cofacteurs de HSP70, est fréquemment associée à des altérations du renouvellement protéique et de la tolérance au stress dans des contextes tels que les maladies neurodégénératives et la biologie du cancer, ce qui fait de HSPBP1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques. Dans les cellules humaines, la perturbation de HspBP1 peut aider à préciser comment le repliement assisté par les chaperons s’articule avec les voies de dégradation des protéines et le remodelage adaptatif au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HspBP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HSPBP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HSPBP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HSPBP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HspBP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HSPBP1 pour l'étude de la signalisation de HspBP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HSPBP1 essentiels à la fonction de HspBP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HSPBP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HspBP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HspBP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HSPBP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HspBP1 plasmide HDR (h) et le HspBP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HSPBP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HSPBP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.