Plasmide Double Nickase (m) HSP90B1/HSP90 beta: sc-420980-NIC

Hsp90ab1 code la chaperonne moléculaire cytosolique HSP90 bêta, qui soutient la protéostasie en favorisant le repliement, la stabilisation et la maturation conformationnelle d’un large éventail de protéines clientes, notamment des kinases, des récepteurs aux hormones stéroïdiennes et des adaptateurs de signalisation. Grâce à des cycles de chaperonnage dépendants de l’ATP avec des co‑chaperonnes, elle contribue aux réponses au stress, au contrôle qualité des protéines et à l’assemblage de complexes multiprotéiques, en s’articulant avec des voies telles que MAPK/ERK, PI3K–AKT et la signalisation de l’immunité innée. L’activité de HSP90 bêta chez la souris est également associée à des processus d’homéostasie cellulaire, notamment l’autophagie et le renouvellement via le protéasome, qui modulent les réponses au choc thermique et au stress oxydant. Une capacité de chaperonnage dérégulée est fréquemment étudiée dans le contexte de la dépendance à la signalisation oncogénique, du mauvais repliement protéique dans les maladies neurodégénératives et des mécanismes des maladies inflammatoires, faisant de Hsp90ab1 un nœud utile pour l’analyse des voies de signalisation.

HSP90B1/HSP90 beta Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Hsp90ab1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Hsp90ab1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Hsp90ab1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Hsp90ab1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.