HSP 78 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413434

Übersicht

CLPB kodiert die menschliche mitochondriale AAA+-Chaperone HSP78, eine Protein-Disaggregase, die mit den mitochondrialen HSP70/HSP60-Systemen zusammenarbeitet, um fehlgefaltete oder aggregierte Proteine in der Matrix zu extrahieren und wieder zu refalten. Durch ATP-abhängiges Remodelling von Proteinkomplexen unterstützt CLPB die mitochondriale Proteostase, die Integrität der Atmungskette und die zelluläre Anpassung an proteotoxischen und oxidativen Stress. Eine CLPB-assoziierte Funktionsstörung wurde mit Phänotypen mitochondrialer Erkrankungen und einer veränderten metabolischen Homöostase in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Signalwege unterstreicht, die Energieproduktion, Stressantworten und Qualitätskontrolle steuern. Als Knotenpunkt der mitochondrialen Proteinüberwachung wird HSP78 häufig in Zusammenhängen untersucht, die mit beeinträchtigter oxidativer Phosphorylierung, Redox-Ungleichgewicht und stressinduzierter Apoptose-Signalgebung einhergehen.

Das HSP 78 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CLPB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CLPB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CLPB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HSP 78-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CLPB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HSP 78-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CLPB-Exone abzielen, die für die HSP 78-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CLPB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HSP 78 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HSP 78 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CLPB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HSP 78 HDR-Plasmid (h) und HSP 78 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CLPB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CLPB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.