HSP 60 Double Nickase Plasmid (h): sc-400336-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HSP 60 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HSP 60 Double-Nickase-Plasmid (h) und HSP 60 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HSPD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSP 60: sc-59567
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSP 60 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400336-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HSP 60 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400336-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HSPD1 kodiert das mitochondriale Chaperonin HSP60 (HSPD1), eine zentrale Komponente des Chaperonin-Systems, das die ATP-abhängige Faltung und Assemblierung importierter mitochondrialer Proteine unterstützt. Durch die Aufrechterhaltung der Proteostase in der mitochondrialen Matrix beeinflusst HSP60 die oxidative Phosphorylierung, die mitochondriale Biogenese und zelluläre Stressantworten und kann die Signalgebung der mitochondrialen Unfolded-Protein-Response modulieren. Störungen von HSPD1 wirken sich auf den mitochondrialen Stoffwechsel, den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und apoptosebezogene Signalwege aus und verknüpfen eine veränderte Funktion oder Expression von HSP60 mit Neurodegeneration, inflammatorischen Phänotypen und krebsassoziiertem metabolischem Remodeling. Als hochkonserviertes Chaperon ist HSP60 zudem relevant für die Untersuchung der mitochondrialen Qualitätskontrolle und proteotoxischen Stresses in vielfältigen experimentellen Kontexten.
HSP 60 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSPD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSPD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSPD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSPD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.