HS3ST4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408176

Panoramica

HS3ST4 codifica l’eparan solfato–glucosamina 3-O-solfotransferasi 4, un enzima residente nel Golgi che catalizza la 3-O-solfatazione durante la biosintesi dei proteoglicani eparan solfato (HSPG). Questa modifica nelle fasi tardive contribuisce a definire la struttura fine dell’eparan solfato e modula il legame dei ligandi extracellulari, plasmando vie di segnalazione quali FGF, VEGF, WNT e processi guidati da chemochine che influenzano adesione, migrazione e differenziamento. Alterando le interazioni recettore–ligando dipendenti dagli HSPG e l’organizzazione della matrice extracellulare, HS3ST4 può incidere sulla comunicazione cellula–cellula e sui segnali del microambiente rilevanti per programmi di sviluppo e fenotipi associati ai tumori. Pattern di solfatazione dell’eparan solfato deregolati, incluse variazioni della capacità di 3-O-solfatazione, sono spesso oggetto di studio nella biologia del cancro, nell’infiammazione e nel rimodellamento tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HS3ST4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HS3ST4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HS3ST4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HS3ST4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HS3ST4 per lo studio della segnalazione di HS3ST4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HS3ST4 critici per la funzione di HS3ST4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HS3ST4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HS3ST4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HS3ST4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HS3ST4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HS3ST4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HS3ST4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HS3ST4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HS3ST4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.