HS3ST4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408176

Descripción general

HS3ST4 codifica la heparán sulfato‑glucosamina 3‑O‑sulfotransferasa 4, una enzima residente del aparato de Golgi que cataliza la 3‑O‑sulfatación durante la biosíntesis de los proteoglucanos de heparán sulfato (HSPG). Esta modificación tardía ayuda a definir la estructura fina del heparán sulfato y modula la unión de ligandos extracelulares, configurando vías de señalización como FGF, VEGF, WNT y procesos guiados por quimiocinas que influyen en la adhesión, la migración y la diferenciación. Al alterar las interacciones receptor‑ligando dependientes de HSPG y la organización de la matriz extracelular, HS3ST4 puede afectar la comunicación célula‑célula y las señales del microambiente relevantes para programas del desarrollo y fenotipos asociados a tumores. Los patrones de sulfatación del heparán sulfato desregulados, incluidos los cambios en la capacidad de 3‑O‑sulfatación, se evalúan con frecuencia en estudios de biología del cáncer, inflamación y remodelación tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HS3ST4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HS3ST4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HS3ST4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HS3ST4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HS3ST4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HS3ST4 para la investigación de la señalización de HS3ST4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HS3ST4 críticos para la función de HS3ST4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HS3ST4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HS3ST4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HS3ST4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HS3ST4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HS3ST4 (h) y el plásmido HDR HS3ST4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HS3ST4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HS3ST4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.