HS3ST3B1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409765

Panoramica

HS3ST3B1 codifica l’eparan solfato glucosammina 3-O-sulfotransferasi 3B1, un enzima localizzato nel Golgi che catalizza la 3-O-solfatazione delle catene di eparan solfato. Questa modifica contribuisce a definire i siti di legame dell’eparan solfato per ligandi extracellulari e modella i microambienti di segnalazione sulla superficie cellulare e nella matrice extracellulare. Modulando la fine struttura dell’eparan solfato, HS3ST3B1 può influenzare processi quali la segnalazione di fattori di crescita e chemochine, le interazioni cellula–cellula e la migrazione dipendente dall’adesione. Alterazioni dei pattern di solfatazione dell’eparan solfato sono associate a reti di segnalazione deregolate implicate nella biologia del cancro, nell’infiammazione e nel rimodellamento tissutale, rendendo HS3ST3B1 un bersaglio utile per studi meccanicistici delle vie dipendenti dai glicosaminoglicani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST3B1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HS3ST3B1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HS3ST3B1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HS3ST3B1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HS3ST3B1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HS3ST3B1 per lo studio della segnalazione di HS3ST3B1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HS3ST3B1 critici per la funzione di HS3ST3B1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HS3ST3B1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HS3ST3B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HS3ST3B1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HS3ST3B1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HS3ST3B1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HS3ST3B1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HS3ST3B1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.