HS3ST1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405358

Descripción general

HS3ST1 codifica la heparán sulfato–glucosamina 3-O-sulfotransferasa 1, una enzima localizada en el aparato de Golgi que cataliza la 3-O-sulfatación de las cadenas de heparán sulfato, generando motivos poco frecuentes que modulan las interacciones proteína–glicosaminoglicano. Al moldear la estructura fina del heparán sulfato, HS3ST1 influye en la organización de la matriz extracelular y en las funciones de correceptores en la superficie celular que ajustan vías de señalización en las que participan factores de crecimiento, quimiocinas y morfógenos. Los patrones alterados de sulfatación del heparán sulfato se asocian con cambios en la adhesión y migración celular, y en la señalización inflamatoria, procesos frecuentemente implicados en la biología tumoral y en fenotipos del neurodesarrollo. Como determinante de la estructura del heparán sulfato, HS3ST1 se estudia por su papel en la regulación de la unión de ligandos y la dinámica de la señalización aguas abajo en diversos contextos celulares.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO HS3ST1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen HS3ST1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del HS3ST1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de HS3ST1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína HS3ST1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en HS3ST1 para la investigación de la señalización de HS3ST1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de HS3ST1 críticos para la función de HS3ST1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de HS3ST1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido HS3ST1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido HS3ST1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus HS3ST1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR HS3ST1 (h) y el plásmido HDR HS3ST1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología HS3ST1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana HS3ST1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.