HS3ST1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405358

Panoramica

HS3ST1 codifica la 3-O-solfotransferasi 1 dell’eparan solfato–glucosamina, un enzima localizzato nel Golgi che catalizza la 3-O-solfatazione delle catene di eparan solfato, generando motivi rari che modulano le interazioni proteina–glicosaminoglicano. Modellando la struttura fine dell’eparan solfato, HS3ST1 influenza l’organizzazione della matrice extracellulare e le funzioni dei co-recettori di superficie cellulare che regolano vie di segnalazione coinvolgenti fattori di crescita, chemochine e morfogeni. Alterazioni nei pattern di solfatazione dell’eparan solfato sono associate a cambiamenti nell’adesione e nella migrazione cellulare e nella segnalazione infiammatoria, processi spesso implicati nella biologia dei tumori e in fenotipi del neurosviluppo. In quanto determinante della struttura dell’eparan solfato, HS3ST1 è oggetto di studio per il suo ruolo nella regolazione del legame dei ligandi e delle dinamiche di segnalazione a valle in diversi contesti cellulari.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HS3ST1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HS3ST1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HS3ST1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HS3ST1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HS3ST1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HS3ST1 per lo studio della segnalazione di HS3ST1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HS3ST1 critici per la funzione di HS3ST1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HS3ST1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HS3ST1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HS3ST1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HS3ST1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HS3ST1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HS3ST1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HS3ST1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HS3ST1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.