HPRT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417332-ACT

HPRT1は、ホスホリボシルトランスフェラーゼ（HPRT：hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase）をコードしており、プリン・サルベージ経路における主要酵素として、PRPPを用いてヒポキサンチンおよびグアニンをそれぞれIMPおよびGMPへ変換する反応を触媒します。ヌクレオチドプールの恒常性を維持することで、HPRTはDNA/RNA合成を支えるとともに、代謝ストレスや複製需要に対する細胞応答にも影響します。HPRT1の活性はプリン代謝の中核を成し、PRPP依存的な生合成フラックスとも交差し、哺乳類細胞遺伝学では選択マーカー座として広く利用されています。HPRT1の機能喪失変異はプリン再利用を障害し、先天代謝異常や神経行動学的表現型と関連することから、代謝制御や遺伝子型—表現型関係を研究するための扱いやすいモデルを提供します。

HPRT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HPRT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HPRT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HPRT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHPRT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HPRTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHPRT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHPRT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHPRT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHPRT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。