Plasmide CRISPR d'Activation (h) HPA1: sc-402215-ACT

HPSE humain code l’héparanase (HPA1), une endo‑β‑D‑glucuronidase qui clive les chaînes de sulfate d’héparane des protéoglycanes, remodelant ainsi la matrice extracellulaire et les membranes basales. En libérant des facteurs de croissance et des cytokines liés au sulfate d’héparane, HPA1 module les interactions cellule–matrice, les gradients de chimiokines, la signalisation angiogénique et le trafic des cellules inflammatoires, en s’inscrivant dans des voies qui contrôlent l’adhésion, la migration et la perméabilité tissulaire. L’activité de HPSE est associée à des altérations de la dynamique du microenvironnement tumoral, à la biologie de l’invasion et des métastases, ainsi qu’à une inflammation dérégulée dans de multiples contextes pathologiques. Par conséquent, HPSE est largement utilisée comme nœud mécanistique pour étudier le renouvellement de la matrice extracellulaire, le recrutement des cellules immunitaires et la signalisation médiée par les protéoglycanes.

HPA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HPSE sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HPA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HPSE dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HPSE, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HPA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HPSE natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HPA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HPA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HPSE silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.