Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxC6: sc-403393-ACT

HOXC6 code le facteur de transcription homeobox humain HoxC6, un régulateur se liant à l’ADN qui contribue à l’établissement de la polarité antéro-postérieure et aux décisions de destin cellulaire au cours du développement embryonnaire. Dans les tissus différenciés, HOXC6 participe à des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la migration et la différenciation épithéliale, via des interactions dépendantes du contexte avec des cofacteurs qui modulent la chromatine et l’activité des enhancers. Une expression dérégulée de HOXC6 a été rapportée dans de nombreux types tumoraux et fait souvent l’objet d’études pour son rôle dans la plasticité de lignée, l’expression de gènes associée à l’invasion et des états de différenciation altérés. En tant que régulateur du développement doté d’une large portée transcriptionnelle, HOXC6 est pertinent pour la recherche sur la morphogenèse, les réseaux transcriptionnels oncogéniques et les circuits de régulation génique.

HoxC6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXC6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxC6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXC6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXC6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxC6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXC6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxC6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxC6 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXC6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.