HoxB4 Double Nickase Plasmid (h): sc-404013-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HoxB4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HoxB4 Double-Nickase-Plasmid (h) und HoxB4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HOXB4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HoxB4: sc-365927
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HoxB4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404013-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxB4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404013-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXB4 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxB4, einen DNA-bindenden Regulator, der während der Embryonalentwicklung die anteroposteriore Achse ausbildet und die Zellidentität festlegt, indem er die Genexpressionsprogramme steuert, die die Linienfestlegung bestimmen. In adulten Geweben wird die Aktivität von HoxB4 mit der Selbsterneuerung und Differenzierung hämatopoetischer Stamm- und Vorläuferzellen in Verbindung gebracht und ist in entwicklungsbiologische Transkriptionsnetzwerke eingebunden, zu denen auch HOX-Kofaktoren und chromatinmodifizierende Komplexe gehören. Eine fehlregulierte HOXB4-Expression wurde bei hämatologischen Malignomen und anderen Krebsarten beschrieben, bei denen eine veränderte transkriptionelle Kontrolle zu aberranter Proliferation und beeinträchtigter Differenzierung beitragen kann. Da HoxB4 als Masterregulator fungiert, bietet eine Störung von HOXB4 einen gut zugänglichen Ansatz, um transkriptionelle Schaltkreise, epigenetische Zustandsübergänge und die Reaktivierung entwicklungsbiologischer Signalwege in Krankheitsmodellen zu untersuchen.
HoxB4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HOXB4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HOXB4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HOXB4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HOXB4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.