Plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxB4 (h): sc-404013

Présentation

HOXB4 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxB4, un régulateur se liant à l’ADN de manière spécifique de séquence, qui contribue à établir la régionalisation antéro-postérieure au cours du développement et contrôle des programmes de spécification de lignée dans les compartiments hématopoïétiques et autres progéniteurs. L’activité de HoxB4 coordonne des réseaux transcriptionnels régissant l’auto-renouvellement des cellules souches/progénitrices, le calendrier de la différenciation et la progression du cycle cellulaire, en s’intégrant à des voies de signalisation développementales plus larges ainsi qu’à des mécanismes de régulation de la chromatine. Une expression dérégulée de HOXB4 a été rapportée dans des contextes d’hémopathies malignes et ce gène est fréquemment étudié dans le cadre des circuits de régulation du cluster HOX, de l’architecture enhanceur–promoteur et du contrôle épigénétique de l’identité cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxB4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HOXB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HOXB4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HOXB4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HoxB4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HOXB4 pour l'étude de la signalisation de HoxB4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HOXB4 essentiels à la fonction de HoxB4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HOXB4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HoxB4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HoxB4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HOXB4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HoxB4 plasmide HDR (h) et le HoxB4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HOXB4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HOXB4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.