HoxA3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404634

Übersicht

HOXA3 kodiert den Homeobox-Transkriptionsfaktor HoxA3, einen sequenzspezifischen, DNA-bindenden Regulator, der während der Embryogenese die anterior–posteriore Identität festlegt und Programme steuert, die Morphogenese, epitheliale Differenzierung und Gewebeumbau koordinieren. HoxA3 ist in regulatorische Netzwerke des HOX-Clusters eingebunden und verzahnt sich mit Entwicklungs-Signalwegen wie WNT, BMP/TGF-β und Retinsäure, um Zellschicksalsentscheidungen und räumliche Genexpression zu formen. In adulten Kontexten wurden eine veränderte HOXA3-Expression oder eine epigenetische Fehlregulation mit aberranten Differenzierungszuständen und einer transkriptionellen Neuverdrahtung in Verbindung gebracht, wie sie bei Krebs und anderen Erkrankungen mit Reaktivierung entwicklungsbezogener Gene beobachtet werden. Als nuklearer Regulator wird HoxA3 häufig in der Kartierung genregulatorischer Netzwerke, in Modellen der Lineage-Festlegung und bei der chromatinkontrollierten Regulation der Transkription untersucht.

Das HoxA3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HOXA3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HOXA3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HOXA3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HoxA3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HOXA3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HoxA3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HOXA3-Exone abzielen, die für die HoxA3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HOXA3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HoxA3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HoxA3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HOXA3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HoxA3 HDR-Plasmid (h) und HoxA3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HOXA3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HOXA3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.