Plasmide Double Nickase (h) HoxA10: sc-401463-NIC

HOXA10 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxA10, un régulateur de la liaison à l’ADN spécifique de séquence qui orchestre la mise en place des structures embryonnaires et l’homéostasie des tissus adultes en contrôlant des réseaux de gènes déterminant les lignages. Dans les contextes hématopoïétiques et mésenchymateux, HoxA10 intègre des programmes de signalisation du développement afin de moduler la prolifération, la différenciation, l’adhésion et le remodelage de la matrice extracellulaire, avec des effets en aval sur les voies de régulation du cycle cellulaire et de la transcription. Une expression dérégulée de HOXA10 ou une altération des circuits de régulation a été associée à une maturation myéloïde perturbée et à une reprogrammation transcriptionnelle plus large observée dans des états liés aux tumeurs, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le contrôle des gènes du développement dans des modèles pertinents pour la maladie. En biologie de la reproduction, HOXA10 contribue aux programmes de différenciation de l’endomètre et de réceptivité utérine, ce qui soutient les recherches sur les réseaux transcriptionnels répondant aux hormones.

HoxA10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HOXA10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HOXA10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HOXA10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HOXA10.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.