Plasmide CRISPR d'Activation (h) Hox11: sc-404662-ACT

TLX1 (Hox11) est un facteur de transcription à homéoboîte qui régule la mise en place des structures embryonnaires et la spécification des lignages, avec des rôles marqués dans les programmes de différenciation hématopoïétique. En se liant à l’ADN au niveau des éléments de réponse HOX, Hox11 module des réseaux transcriptionnels qui s’entrecroisent avec la signalisation du développement et le remodelage de la chromatine pour contrôler la prolifération et les décisions de destin cellulaire. Une expression dérégulée de TLX1 est liée à des états d’expression génique développementale altérés et a été associée à la leucémie aiguë lymphoblastique T, ce qui étaye son utilisation comme nœud d’étude de la reprogrammation transcriptionnelle oncogénique. Dans des modèles cellulaires humains, TLX1 constitue un régulateur facilement manipulable pour étudier les circuits de régulation génique pilotés par les HOX et des phénotypes de différenciation dépendants du contexte.

Hox11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TLX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Hox11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TLX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TLX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Hox11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TLX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Hox11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Hox11 dans les cellules tumorales présentant une expression de TLX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.