Plasmide CRISPR d'Activation (h) Homer: sc-401175-ACT

Le gène humain **HOMER1** code Homer, une protéine d’échafaudage de la densité postsynaptique qui couple les récepteurs métabotropes du glutamate de groupe I et d’autres protéines synaptiques aux modules de signalisation intracellulaire du Ca2+, notamment la libération de calcium dépendante des récepteurs à l’IP3. Grâce à des interactions médiées par son domaine EVH1, Homer organise des complexes multiprotéiques qui influencent la neurotransmission glutamatergique, la plasticité synaptique et le remodelage des épines dendritiques dépendant de l’activité. **HOMER1** participe à des voies reliant l’activation des récepteurs à l’homéostasie du calcium et à une signalisation kinasiques en aval, qui façonnent l’excitabilité neuronale et les réponses transcriptionnelles. Des altérations de l’expression de **HOMER1** ou de la connectivité de son réseau ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques des dysfonctionnements synaptiques.

Homer-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOMER1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Homer-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOMER1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOMER1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Homer-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOMER1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Homer-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Homer-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOMER1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.