Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
hnRNP E1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423930
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- hnRNP E1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico hnRNP E1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: hnRNP E1 Anticuerpo (E-2): sc-137249
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
hnRNP E1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423930 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Pcbp1 codifica la ribonucleoproteína nuclear heterogénea E1 (hnRNP E1) de ratón, una proteína de unión a ARN que reconoce elementos ricos en C para controlar la estabilidad y la traducción del ARNm. hnRNP E1 participa en la regulación génica postranscripcional vinculada a la progresión del ciclo celular, las respuestas al estrés y la diferenciación, al modular la disponibilidad de transcritos en el citoplasma y su traducción en los ribosomas. A través de sus funciones en el procesamiento de ARN y el control translacional, hnRNP E1 influye en vías asociadas con la transición epitelio-mesenquimal, la remodelación del citoesqueleto y programas de expresión génica dependientes de señales. La actividad desregulada de PCBP1/hnRNP E1 se ha asociado con una homeostasis del ARN alterada y con fenotipos relevantes para la biología tumoral y la señalización inflamatoria en modelos experimentales.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO hnRNP E1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pcbp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pcbp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pcbp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína hnRNP E1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pcbp1 para la investigación de la señalización de hnRNP E1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Pcbp1 críticos para la función de hnRNP E1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pcbp1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido hnRNP E1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido hnRNP E1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pcbp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR hnRNP E1 (m) y el plásmido HDR hnRNP E1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pcbp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pcbp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.