Plásmido CRISPR de Activación (h) hnRNP A1: sc-400704-ACT

HNRNPA1 codifica la ribonucleoproteína nuclear heterogénea humana A1 (hnRNP A1), una abundante proteína de unión a ARN que coordina el empalme (splicing) del pre-ARNm, la selección alternativa de exones, la exportación nuclear del ARNm y la regulación de la traducción mediante interacciones con componentes del espliceosoma y con la maquinaria de transporte de ARN. hnRNP A1 también participa en el mantenimiento de los telómeros y en la dinámica de los gránulos de estrés, vinculando el metabolismo del ARN con las respuestas celulares al estrés. La desregulación del procesamiento de ARN dependiente de HNRNPA1 y la agregación proteica se han asociado con fenotipos neurodegenerativos y neuromusculares, y se ha descrito actividad alterada de hnRNP A1 en múltiples contextos de cáncer, donde la remodelación de isoformas de transcritos influye en las vías de proliferación y supervivencia. Como regulador central de la plasticidad del transcriptoma, hnRNP A1 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan la estabilidad del ARN, programas de expresión génica adyacentes a la respuesta al daño del ADN y la proteostasis.

hnRNP A1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HNRNPA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

hnRNP A1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HNRNPA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HNRNPA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de hnRNP A1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HNRNPA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de hnRNP A1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía hnRNP A1 en células tumorales con expresión de HNRNPA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.