Plasmide CRISPR d'Activation (h) hnRNP A/B: sc-403454-ACT

HNRNPAB code la ribonucléoprotéine nucléaire hétérogène humaine A/B (hnRNP A/B), une protéine liant l’ARN qui s’associe aux transcrits naissants pour réguler l’épissage du pré-ARNm, la polyadénylation alternative, la stabilité de l’ARNm et le transport nucléocytoplasmique. hnRNP A/B participe à l’assemblage des complexes ribonucléoprotéiques et coordonne des programmes de régulation génique post-transcriptionnelle qui façonnent la progression du cycle cellulaire et les réponses transcriptionnelles au stress. La dérégulation de membres de la famille hnRNP, notamment via des modifications de l’expression de HNRNPAB ou des profils d’épissage, a été associée à des réseaux aberrants de maturation de l’ARN observés dans de multiples contextes pathologiques, en particulier des phénotypes prolifératifs et liés à la neurodégénérescence. Par conséquent, HNRNPAB est fréquemment étudié dans les voies contrôlant le métabolisme de l’ARN, la régulation globale de l’épissage et le remodelage du transcriptome.

hnRNP A/B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HNRNPAB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

hnRNP A/B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HNRNPAB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HNRNPAB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de hnRNP A/B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HNRNPAB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de hnRNP A/B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie hnRNP A/B dans les cellules tumorales présentant une expression de HNRNPAB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.