hnRNP A/B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403454-ACT

HNRNPAB codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea umana A/B (hnRNP A/B), una proteina legante l’RNA che si associa ai trascritti nascenti per regolare lo splicing del pre-mRNA, la poliadenilazione alternativa, la stabilità dell’mRNA e il trasporto nucleo-citoplasmatico. hnRNP A/B partecipa all’assemblaggio di complessi ribonucleoproteici e coordina programmi di regolazione genica post-trascrizionale che modulano la progressione del ciclo cellulare e le risposte trascrizionali allo stress. La deregolazione dei membri della famiglia hnRNP, inclusi cambiamenti nell’espressione di HNRNPAB o nei suoi pattern di splicing, è stata collegata a reti anomale di processamento dell’RNA osservate in molteplici contesti patologici, in particolare fenotipi proliferativi e associati alla neurodegenerazione. Di conseguenza, HNRNPAB è spesso studiato nei pathway che governano il metabolismo dell’RNA, il controllo dello splicing su scala genomica e il rimodellamento del trascrittoma.

hnRNP A/B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HNRNPAB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hnRNP A/B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HNRNPAB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HNRNPAB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hnRNP A/B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HNRNPAB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hnRNP A/B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hnRNP A/B nelle cellule tumorali con espressione di HNRNPAB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.