Plasmide CRISPR/Cas9 KO HMX2 (m): sc-420886

Présentation

Hmx2 code le facteur de transcription à homéoboîte HMX2, une protéine nucléaire se liant à l’ADN qui régule des programmes d’expression génique au cours du développement embryonnaire. Chez la souris, HMX2 est impliqué dans la mise en place des patrons de développement et la différenciation des structures sensorielles, avec des rôles majeurs dans la morphogenèse de l’oreille interne et la formation du système vestibulaire via le contrôle transcriptionnel de la spécification des lignages. En coordonnant des réseaux transcriptionnels du développement, HMX2 influence les décisions de destinée cellulaire, l’architecture tissulaire et la maturation d’épithéliums spécialisés. La perturbation des voies liées à Hmx2 est pertinente pour l’étude des anomalies congénitales affectant l’audition et l’équilibre, ainsi que des mécanismes plus larges de dérégulation du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HMX2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hmx2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hmx2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hmx2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HMX2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hmx2 pour l'étude de la signalisation de HMX2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hmx2 essentiels à la fonction de HMX2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hmx2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HMX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HMX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hmx2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HMX2 plasmide HDR (m) et le HMX2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hmx2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hmx2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.